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Luminex Multiplex Assays란 무엇인가요?

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작성자 관리자
댓글 0건 조회 481회 작성일 23-01-04 08:19

본문

 

1. Luminex 분석이란 무엇인가요? 

 

Luminex 분석은 하나의 샘플에서 여러 분석 물질을 정확하게 측정하는 일종의 면역 분석입니다. Luminex® xMAP® 기술은 최대 100개의 분석물질을 동시에 다중 검출할 수 있는 비드 기반 면역분석법입니다. 색상으로 구분된 microsphere 또는 bead는 고유한 스펙트럼 또는 비드 영역에 해당하는 다양한 비율의 적색 및 적외선 형광단으로 내부적으로 염색됩니다. 샘플에서 여러 사이토카인 및 기타 바이오마커의 정량화는 생물학적 과정 및 질병에 대한 중요한 정보를 제공합니다.

 

원하는 분석물에 특이적인 항체는 고유한 비드 영역에 결합되고 샘플과 함께 배양됩니다. 결합되지 않은 물질을 세척한 후, 샘플은 biotin화된 검출 항체 및 streptavidin-phycoerythrin (PE) 리포터의 혼합물과 함께 배양됩니다. Luminex 기기를 사용하여 red laser로 bead의 형광을 측정하고 green laser로 비드에 결합된 분석물의 양에 비례하는 PE 파생 신호의 크기를 결정합니다.

 


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2. Luminex Assay를 이용하면 어떤 점이 좋은가요?

 

 Small Sample Volume - 소량의 샘플로 multiple analyte를 동시에 측정할 수 있습니다. 

 Save Time and Money. - multiple single-analyte ELISA kit을 이용하는 것 보다 비용을 훨씬 절감할 수 있습니다. 

 Flexibility – 연구 목적에 맞게 원하는 타겟을 선택할 수 있습니다. 

 Low Variability - 한번의 실험으로부터 도출된 multiple data point는 실험 변동성을 최소화 합니다. 

 

 

 

3. Luminex Assay Kit와 Luminex High Performance Assay Kit중 어떤 kit이 내 실험에 맞을까요? 

 

경제적이며 스크리닝 목적의 Multiplex kit을 찾으신다면 Luminex Assay가 적합하고, 더 낮은 농도를 측정할 수 있는 Multiplex kit을 찾으신다면 Luminex High Performance Assay가 적합합니다. 

 

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4. R&D Systems Luminex® Assay protocol에 대해 알려주세요.

 

일반적인 실험 방법은 다음과 같습니다.

 

1) 지시에 따라 모든 시약을 준비합니다.

2) 각 웰에 50 μL의 standard / 샘플을 추가합니다.

3) 각 웰에 희석된 Microparticle Cocktail 50 μL을 추가합니다. 800rpm의 셰이커에서 RT에서 2시간 동안 배양합니다.

4) 각 웰에서 액체를 제거하고 100 μL 세척 버퍼로 채우고 액체를 다시 제거하여 세척합니다. 

5) 세척을 3회 수행합니다.

6) 희석된 Biotin-antibody cocktail 50 μL을 각 웰에 추가합니다.

7) 800rpm의 쉐이커에서 RT에서 1시간 동안 덮고 배양합니다.

8) 4단계에서와 같이 세척을 반복합니다.

9) 각 웰에서 액체를 제거하고 100 μL 세척 버퍼로 채우고 액체를 다시 제거하여 세척합니다. 

10) Luminex/MAGPIX Instrument를 사용하여 90분 이내에 판독합니다.

 

  

아래의 동영상에서 자세한 방법을 확인하실 수 있습니다.


 

 

 

5. Luminex High Performance Assay에 control이 제공되나요?

네, 각 panel에 specific한 control을 제공합니다. 

 

 

6. Luminex Performance 분석 결과는 Quantikine® ELISA 키트와 상관성이 있나요?

네, 상관성이 있습니다.

 

 

7. 여러 Luminex® Performance Assay Base Kit의 분석물을 결합하여 맞춤형 패널을 만들 수 있습니까?

아니요, Performance assay kit는 특정 panel내 analyte에 대한 standard curve를 제공합니다. 

 

 

8. Multiplex kit을 한번에 다 사용해야 하나요?

아니요, 사용하지 않은 plate 부분을 sealer로 덮어 두고, 차후에 부분적으로 실행하실 수 있습니다. 이미 사용된 plate well을 재사용하는 것은 오염의 우려가 있으므로 피해야 합니다.

 

 

9.얼마나 많은 샘플을 하나의 plate로 분석할 수 있나요?

각 Luminex multiplex kit은 96well plate로 제공되므로, standard와 sample을 duplicate로 실행한다면, 약 40개의 샘플을 하나의 plate로 분석할 수 있습니다.

 

 

10. 검출 한계(LOD)와 정량 하한(LLOQ)의 차이점은 무엇인가요?

검출 하한선(LOD)은 최소 검출 가능 용량(MDD)이라고도 합니다. 이 계산에서 얻은 값은 background와 구별될 수 있는 절대 최소값으로 간주됩니다. 정량화 하한(LLOQ)은 표준 곡선의 가장 낮은 지점입니다. 이 값은 샘플에서 정량화할 수 있는 가장 낮은 농도 값을 제공합니다. 가장 낮은 표준의 값 아래로 떨어지는 모든 샘플 값은 LLOQ 미만으로 보고되어야 합니다.

 


 11. 분석을 맡길 수 있을까요?

네, 원하시는 타겟을 알려주시면 분석 후 결과값을 보내드립니다.

분석서비스 페이지를 참고해 주세요.

 


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